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簡(jiǎn)要描述:動(dòng)物體外受精實(shí)驗(yàn)(IVF) 指在人工模擬的體內(nèi)環(huán)境中,使哺乳動(dòng)物的精子和卵子完成受精過程的技術(shù)。受精后形成的胚胎可移植至受體子宮發(fā)育,所得后代稱“試管動(dòng)物"(test-tube animal)。
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動(dòng)物體外受精(IVF) 指在人工模擬的體內(nèi)環(huán)境中,使哺乳動(dòng)物的精子和卵子完成受精過程的技術(shù)。受精后形成的胚胎可移植至受體子宮發(fā)育,所得后代稱“試管動(dòng)物"(test-tube animal)。
核心生物學(xué)原理:
精子獲能(Capacitation):
精子需去除表面“去能因子"(如糖蛋白),通過添加肝素、鈣離子或血清白蛋白誘導(dǎo)獲能,增強(qiáng)運(yùn)動(dòng)能力與穿透卵子能力。
獲能過程依賴物種特異性條件(小鼠需30分鐘,豬需2–3小時(shí))。
卵母細(xì)胞成熟(Oocyte Maturation):
體內(nèi)成熟卵子可直接使用;未成熟卵子需體外培養(yǎng)至MII期(第二次減數(shù)分裂中期)。
受精兼容性:人工環(huán)境需模擬輸卵管生理?xiàng)l件(溫度、pH、滲透壓、營(yíng)養(yǎng))以支持精卵結(jié)合。
方法 | 適用場(chǎng)景 | 操作要點(diǎn) |
---|---|---|
超數(shù)排卵法 | 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(小鼠、大鼠) | 注射FSH/LH激素誘導(dǎo)多排卵,從輸卵管采集成熟卵子 |
活體卵巢穿刺法 | 小牲畜(牛、羊)臨床操作 | 超聲或腹qiang鏡引導(dǎo)采集活體卵巢卵子 |
宰殺后卵巢采集法 | 屠宰場(chǎng)資源利用 | 取新鮮卵巢分離未成熟卵子,體外培養(yǎng)成熟 |
采集:附睪穿刺或精液收集。
獲能處理:
化學(xué)法:添加肝素(牛)、鈣離子載體(小鼠)。
生物法:與含卵丘細(xì)胞的卵泡液共培養(yǎng)。
技術(shù) | 原理 | 應(yīng)用場(chǎng)景 |
---|---|---|
共培養(yǎng)法 | 精卵在培養(yǎng)液中自然結(jié)合 | 常規(guī)IVF(牛、小鼠) |
顯微注射法(ICSI) | 直接注入單個(gè)精子至卵胞質(zhì) | 低活力精子或基因編輯動(dòng)物 |
培養(yǎng)基:KSOM+AA(小鼠)、SOF(牛)、TALP系列(跨物種)。
發(fā)育監(jiān)測(cè):形態(tài)學(xué)分級(jí)。
移植:同步受體發(fā)情周期,手術(shù)/非手術(shù)法植入子宮。
冷凍保存:液氮(-196℃)長(zhǎng)期儲(chǔ)存遺傳資源。
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