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基因激活是指細(xì)胞內(nèi)特定基因的表達(dá)被啟動(dòng)或增強(qiáng)的過(guò)程,通常發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平。這一過(guò)程受到轉(zhuǎn)錄因子、增強(qiáng)子、啟動(dòng)子以及表觀遺傳修飾(如組蛋白乙?;?、DNA去甲基化)等多種因素的調(diào)控?;蚣せ钤诩?xì)胞分化、發(fā)育、應(yīng)激反應(yīng)和代謝調(diào)控等生命活動(dòng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用,是基因表達(dá)調(diào)控的重要機(jī)制之一。
基因沉默實(shí)驗(yàn)是指細(xì)胞內(nèi)特定基因的表達(dá)被抑制或關(guān)閉的現(xiàn)象,通常發(fā)生在轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)錄后水平。常見(jiàn)的機(jī)制包括DNA甲基化、組蛋白修飾以及RNA干擾(如siRNA和miRNA介導(dǎo)的mRNA降解或翻譯抑制)?;虺聊谡{(diào)控基因表達(dá)、維持基因組穩(wěn)定性、細(xì)胞分化以及防御病毒等方面具有重要作用,同時(shí)也與某些疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。
基因編輯陽(yáng)性細(xì)胞篩選是指在基因編輯實(shí)驗(yàn)(如CRISPR/Cas9)后,通過(guò)特定方法識(shí)別和分離出成功發(fā)生目標(biāo)基因修飾的細(xì)胞。常用的篩選方法包括抗生素篩選(如利用抗性基因標(biāo)記)、熒光蛋白標(biāo)記篩選、PCR或測(cè)序驗(yàn)證等。這一過(guò)程對(duì)于獲得純合或雜合突變細(xì)胞系、研究基因功能或進(jìn)行疾病模型構(gòu)建至關(guān)重要。
CRISPR/Cas12b系統(tǒng)實(shí)驗(yàn):CRISPR/Cas12b(原稱 C2c1)屬于 Class 2 Type V-B 型 CRISPR 系統(tǒng),是繼 Cas9 和 Cas12a 后的重要基因編輯工具。
CRISPR/Cas12a系統(tǒng)實(shí)驗(yàn):CRISPR/Cas12a(原稱 Cpf1)屬于 Class 2 Type V 型 CRISPR 系統(tǒng),是細(xì)菌與古菌的適應(yīng)性免疫機(jī)制,用于識(shí)別并切割入侵的病毒或質(zhì)粒 DNA。與 Cas9 相比,其du特的工作模式使其在基因編輯、分子檢測(cè)及多基因調(diào)控中展現(xiàn)顯著優(yōu)勢(shì)。
細(xì)胞基因編輯(又稱基因組編輯)是指利用分子工具在活細(xì)胞中定點(diǎn)插入、刪除或替換DNA堿基,從而改變基因功能或調(diào)控元件表達(dá)的技術(shù)。其核心機(jī)制依賴于DNA雙鏈斷裂(DSB)的誘導(dǎo)與修復(fù)
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